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目的:构建鼠核糖体蛋白L8(RPL8)基因的重组腺病毒载体,为转染小鼠树突状细胞(DC)为制备DC疫苗奠定基础.方法:用RT-PCR克隆目的基因RPL8,与载体连接、酶切、插入、并转移到pAdxsi腺病毒骨架载体上,包装扩增成腺病毒颗粒.用重组腺病毒及空病毒Ad-EGFP(作为阴性对照)转染小鼠DC细胞,荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白的表达.结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了携带RPL8基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度(1.6 × 1010 PFU/mL)的重组腺病毒.结论:成功构建了携带RPL8的重组腺病毒,为进一步研究RPL8基因修饰DC疫苗奠定基础.

作者:谈艳芳;杜清波;黄俊琼

来源:实用医学杂志 2012 年 28卷 17期

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作者:
谈艳芳;杜清波;黄俊琼
来源:
实用医学杂志 2012 年 28卷 17期
标签:
腺病毒载体 RPL8 基因重组
目的:构建鼠核糖体蛋白L8(RPL8)基因的重组腺病毒载体,为转染小鼠树突状细胞(DC)为制备DC疫苗奠定基础.方法:用RT-PCR克隆目的基因RPL8,与载体连接、酶切、插入、并转移到pAdxsi腺病毒骨架载体上,包装扩增成腺病毒颗粒.用重组腺病毒及空病毒Ad-EGFP(作为阴性对照)转染小鼠DC细胞,荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白的表达.结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了携带RPL8基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度(1.6 × 1010 PFU/mL)的重组腺病毒.结论:成功构建了携带RPL8的重组腺病毒,为进一步研究RPL8基因修饰DC疫苗奠定基础.