目的：研究多能性因子Nanog 对HepG2细胞周期相关蛋白表达的影响，进而探索其对HepG2细胞增殖能力的影响。方法本研究通过基因编辑工具TALENs介导Nanog突变而下调其表达， T7E1内切核酸酶和基因测序分析Nanog突变率，Western blot 检测Nanog蛋白表达水平，RT－PCR检测Nanog mRNA表达水平，实时细胞活性检测系统检测野生型HepG2细胞和Nanog突变的单克隆HepG2细胞的增殖能力。结果 TALENs成功介导Nanog基因突变，两次转染Nanog－TALENs质粒后，T7E1酶切分析混合细胞的打靶效率近40％。突变的单克隆HepG2细胞Nanog mRNA表达水平较野生型HepG2细胞表达下调3．4倍，而Nanog蛋白表达水平表达下调3．6倍。 Nanog突变的单克隆HepG2细胞细胞周期相关蛋白CyclinD1／D3、CyclinE1和CDK2较野生型HepG2细胞表达均下调，Nanog突变的单克隆HepG2细胞表现出明显减弱的增殖能力。结论本研究证实了Nanog 通过调控细胞周期相关蛋白CyclinD1／D3、CyclinE1和CDK2影响HepG2细胞增殖，下调Nanog表达可能通过调控细胞周期相关蛋白的表达而抑制HepG2细胞增殖能力。
作者：杨晓文；于爱清；杨毅
来源：实用肿瘤学杂志 2016 年 30卷 5期
