目的:构建携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的复制缺陷型腺病毒载体.方法:在GenBank检索人CD80、CD40L及IL-12b编码基因序列,确定扩增区域,设计引物.以Trizol抽提人外周血单个核细胞总RNA,使用RT-PCR方法获得IL-12b信号肽、sCD80、sCD40L等基因的编码序列,并分别克隆人T载体.重叠PCR构建sCD80-Linker-sCD40L融合基因,克隆人T载体.使用Stratagene公司AdEasy XL Adenoviral VectorSystem试剂盒构建携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的复制缺陷型腺病毒载体.结果:经测序证实,正确克隆了人IL-12b信号肽、sCD80、sCD40L编码序列,构建了携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的T载体,并进一步构建了携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的复制缺陷型腺病毒载体.本实验病毒滴度为2×1010cfu/ml.结论:成功构建了携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的复制缺陷型腺病毒载体.
作者：魏枫；刘虹；任秀宝
来源：天津医科大学学报 2004 年 10卷 2期
