[目的]对细菌Solitalea canadensis中编码β-N-乙酰氨基己糖苷酶的基因进行克隆,通过原核表达获得重组β-N-乙酰氨基己糖苷酶,并研究其酶学性质.[方法]以Solitalea canadensis基因组DNA为模板,使用加尾PCR的方法克隆编码β-N-乙酰氨基己糖苷酶的基因,构建含有组氨酸标签的重组表达载体,并将重组质粒导人大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达.重组蛋白经Ni-NTA纯化,以对硝基苯酚-p-乙酰氨基葡萄糖(pNP-β-GlcNAc)为底物研究其酶学性质,包括最适温度、最适pH以及金属离子和抑制剂的影响.[结果]从菌株Solitalea canadensis克隆得到了β-N-乙酰氨基己糖苷酶基因片段(GeneBank:WP_014682183.1),全长2586 bp,重组表达所得蛋白表观分子量约为97 kDa,最适pH 6.0,最适温度42℃,但不稳定,半衰期小于5 min.该酶对十二烷基磺酸钠(SDS)敏感,活性受Triton X-100和尿素的抑制.此外二糖分子也能不同程度地抑制该重组酶的活性,特异性抑制剂PugNAc (O-(2-Acetamido-2-deoxy-D-glucopyranosylideneamino) N-phenylcarbamate)对该酶的IC50为2μmol/L.该重组酶蛋白除能水解对硝基苯酚-β-乙酰氨基葡萄糖苷和对硝基苯酚-β-乙酰氨基半乳糖(pNP-β-GalNAc)外,还能对O-链聚糖核心结构Core Ⅱ末端的乙酰氨基葡萄糖进行水解.[结论]本文

作者：王梦；危双；王婷；Josef Voglmeir；刘丽

来源：微生物学报 2017 年 57卷 8期