[目的]建立同时检测副溶血性弧菌toxR、tdh、trh、tlh基因的四重PCR快速检测方法.[方法]分别以副溶血性弧菌的toxR、tdh、trh、tlh4个基因为靶基因,设计4对特异性引物,对4对引物浓度和退火温度进行优化,获得最佳引物比例和扩增条件,建立快速检测致病性副溶血性弧菌的四重PCR体系.通过特异性验证、灵敏度验证以及模拟样品检测进行方法确认.[结果]四重PCR体系扩增条带与预期相符,即115 bp (toxR)、244 bp (tdh)、418 bp (trh)、759 bp (tlh)4个目的条带;用74株副溶血性弧菌和37株非目标菌的测试结果表明,所建立的方法有良好的特异性.该方法对模板DNA的检测灵敏度为50 μg/L,纯培养物的检测灵敏度为6.7× 103 CFU/mL;副溶血性弧菌含量为1.36 CFU/g的人工模拟样品增菌6h后,toxR、tlh、tdh、trh4个基因可同时被检出.[结论]该方法可实现同时检测携带toxR、tdh、trh、tlh4种基因的副溶血性弧菌,对开展致病性副溶血性弧菌的检测研究具有一定现实意义.
作者：林佳琪；苏国成；黄建炜；陈泽辉；周常义
来源：微生物学通报 2016 年 43卷 11期
