目的 观察靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的短发夹RNA(shRNA)对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)生长增殖的影响.方法 根据RNA干扰原理,利用构建的表达shRNA的靶向hTERT mRNA的真核表达质粒(shRNA1),非特异性的shRNA真核表达质粒(shRNA2),转染试剂和正常培养液处理细胞.24h后在共聚焦显微镜下检测荧光表达情况;24h、48h、72h用MTT法检测细胞增殖活性;48h后行HE染色、RT-PCR及端粒酶活性检测.结果 (1)共聚焦显微镜下见shRNA1及shRNA2组有大量的细胞表达荧光.(2)相应时间点各组细胞生长增殖无明显差异.HE染色发现,同等培养条件下,各组细胞生长密度及形态无明显变化.(3)RT-PCR显示各组细胞均无hTERT mRNA的表达;端粒酶活性均为阴性表达.结论 靶向hTERT mRNA的shRNA对正常hMSCs的生长增殖无明显影响,该方法对不表达hTERT的正常体细胞是安全的.
作者：程杰；陶泽璋；肖伯奎；段洪刚；陈始明
来源：卫生研究 2006 年 35卷 5期
