背景:通过RNA干扰沉默特异性的肿瘤相关基因可以抑制肿瘤细胞的增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,为RNA干扰治疗恶性肿瘤提供了一条新的途径.但RNA干扰治疗的安全性如何?是否在沉默特定基因的同时对正常的机体产生危害?目的:观察靶向人端粒酶反转录酶(human telomerase reversetran-scriptase,hTERT)的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对人骨髓间充质干细胞生长增殖的影响,探讨靶向hTERT的RNA干扰技术临床应用的安全性.设计:观察对比实验.单位:三峡大学仁和医院耳鼻咽喉科.材料:实验于2005-11/2006-03在武汉大学医学部中心实验室(BSL-1)完成.主要实验材料:hMSCs(第3代)由北京科宇联合干细胞生物技术有限公司提供并授权使用.以metafectene(德国)为转染试剂.方法:①shRNA质粒的设计、构建及实验分组:根据RNA干扰原理,实验分4组:利用构建的表达shRNA的靶向hTERT mRNA的真核表达质粒(shRNA1组),非特异性的shRNA真核表达质粒(shRNA2组),转染试剂组和正常培养液组处理细胞.②质粒转染:hMSCs细胞常规培养1 d后进行转染.③MTT法测定细胞增殖活性:培养24,48,72 h后采用酶联免疫监测仪测定492 nm处各组吸光度A值.④反转录-聚合酶链反应:培养48 h后用TRIZOL-Reagent一步法分别提取各组的总RNA.以常规培养的喉鳞癌Hep-2细胞

作者：程杰；陶泽璋；段洪刚；肖伯奎；陈始明

来源：中国组织工程研究与临床康复 2008 年 12卷 16期