目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)亚型p38在脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达过程中的作用及其与活性氧(ROS)的关系.方法:采用消化及差速贴壁法培养新生SD大鼠心肌细胞,应用ELISA检测细胞培养上清TNF-α蛋白含量;采用Western blot测定心肌细胞内p38 MAPK的磷酸化水平来反映其活性;细胞内ROS水平采用ROS敏感的荧光探针二氯荧光素二乙酸(DCF-DA)测定.结果:LPS呈时间依赖性升高心肌细胞TNF-α蛋白表达水平和p38活性,与空白对照比较,LPS作用1 h后心肌细胞磷酸化p38水平即显著升高(P<0.01),3 h后培养上清TNF吨蛋白含量明显增加(P<0.05).给予p38活性抑制剂预处理后,培养上清TNF-α蛋白含量明显下降,与LPS组比较有非常显著性差异(P<0.01).LPS作用1 h后,心肌细胞DCF荧光强度也显著升高(P<0.01).与p38活性变化一致,而且给予抗氧化剂氮乙酰半胱氨酸和二亚苯基碘鎓预处理后,心肌细胞磷酸化p38水平明显降低,与LPS组比较差异明显(P<0.05),与空白对照比较无统计学差异.结论:p38MAPK活化是LPS诱导下心肌细胞TNF-α表达的莺要分子机制之一,而ROS水平的升高是心肌细胞p38 MAPK活化的重要前提.
作者:尚福军;王捷频;郑强荪;刘雄涛;薛玉生;李军;赵连友
来源:细胞与分子免疫学杂志 2011 年 27卷 1期