背景:人类半月板纤维软骨细胞可能会对有积极生物学效应的生长因子产生反应,例如人胰岛素样生长因子Ⅰ,半月板细胞也可能会成为将来临床基凶治疗的有效供体.目的:拟观察人半月板纤维软骨细胞对人胰岛素样生长因子Ⅰ的效应反应.设计、时间及地点:开放性实验,于2007-10/2008-04在青岛大学附属医院骨科实验室完成.材料:收集半月板撕裂和盘状半月板患者关节镜手术中切取的半月板组织用于人半月板纤维软骨细胞培养.方法:利用聚合酶链式反虚从人肝细胞cDNA文库中获得人胰岛素样牛长因子Ⅰ基因,将其克隆入双顺反子真核表达载体pIRES2-EGFP中.将关节镜手术中切取的成人半月板组织,体外进行分离培养.利用阳离子脂质体FuGene6将人胰岛素样生长闪子Ⅰ转染入人半月板纤维软骨细胞中.主要观察指标:转染人胰岛素样生长因子Ⅰ后增强型绿色荧光蛋白的表达;检测细胞上清中人胰岛素样生长因子Ⅰ的分泌浓度:流式细胞仪检测细胞转染后的变化.结果:基因测序及酶切,聚合酶链反应等均证实人胰岛素样牛长因子Ⅰ基因的正确克隆,并形成正确的真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1.人半月板纤维软骨细胞在接种40 h后贴擘并伸展为成纤维细胞样,三角形或多角形外观.增强型绿色荧光蛋白的表达逐渐增加,在转染后56 h达到峰值.细胞上清中人胰岛
作者：张海宁；冷萍；张洁；王英振
来源：中国组织工程研究与临床康复 2008 年 12卷 46期
