目的 探讨microRNA-338-3p(miR-338-3p)对神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH和SK-N-MC增殖、侵袭和迁移能力的影响,miR靶基因的确定及靶基因功能的研究.方法 miRNA芯片结果发现miR在神经母细胞瘤中低表达,利用实时定量PCR验证其结果.利用脂质体LipofectamineTM2000将miR-338-3p mimics和miR-338-3p的反义寡核苷酸链(ASO)以及对照质粒分别瞬时转染SK-N-SH和SK-N-MC两种细胞系,MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell实验检测细胞的体外侵袭和迁移能力.利用生物信息学技术预测miR-338-3p的靶基因,并应用EGFP荧光报告载体实验,实时荧光定量PCR和Western blot实验对靶基因进行验证.并利用实时定量PCR检测神经母细胞瘤中靶基因的表达.最后,将靶基因的敲降质粒和过表达质粒以及对照空质粒分别瞬时转染细胞,MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell实验来检测细胞的体外侵袭和迁移能力.结果 实时定量PCR显示与癌旁正常组织相比,miR-338-3p在神经母细胞瘤细胞中低表达(P<0.01);癌细胞转染miR-338-3p mimics后,细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力与对照组相比是减弱的(P<0.01),而在转染了miR-338-3p的ASO封闭miR-338-3p的表达后,细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力与对照组相比是增强的(
作者:鹿洪亭;董蒨;陈鑫;张虹;郝希伟;韩芦芦
来源:中华小儿外科杂志 2013 年 34卷 7期