目的:探讨巨噬细胞胱天蛋白酶募集域蛋白9(card9)在胰腺腺泡细胞导管组织转化中的作用。方法:构建3条靶向card9的小分子干扰RNA(siRNA-card9)，荧光显微镜下观察转染巨噬细胞的荧光强度，采用实时定量PCR法检测巨噬细胞card9 mRNA表达量，筛选巨噬细胞的最佳转染效率。将5×10
5巨噬细胞和100 μg/ml β葡聚糖体外常规培养12、24 h后，分成阳性细胞组(巨噬细胞)、β葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组(card9
－/－巨噬细胞)、β葡聚糖刺激阴性细胞组，采用蛋白质免疫印迹法检测各组巨噬细胞card9蛋白表达水平。取1×10
5巨噬细胞、1×10
5胰腺腺泡细胞加入Transwell小室上下层共培养120 h后，分为阳性细胞组(巨噬细胞+腺泡细胞)、100和500 μg/ml β葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组(card9
－/－巨噬细胞+腺泡细胞)、100和500 μg/ml β葡聚糖刺激阴性细胞组，取下室的胰腺腺泡细胞，采用免疫荧光化学染色法检测腺泡细胞导管组织转化标志物CK19蛋白表达。
结果:siRNA-card9转染巨噬细胞24 h荧光强度最强，浓度为200 nmol/L时抑制效率最高。阳性细胞组、β葡聚糖刺激阳性细胞组、阴性细胞组、β葡聚糖刺激阴性细胞组培养24 h后，巨噬细胞card9蛋白表达量分别为0.81±0
作者：李清华；杨志文
来源：中华胰腺病杂志 2022 年 22卷 4期
