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目的 慢性炎症与肿瘤的发生发展密切相关,但具体机制不详.文章旨在探讨脂多糖对肺腺癌A549细胞增殖的影响,并阐明YAP在其中所发挥的作用.方法 培养人肺腺癌A549细胞,应用CCK-8法检测不同浓度LPS对A549增殖的影响,用Western blot、免疫荧光技术检测LPS处理后A549中YAP定量及定位的变化;实验设空白组、NCsiRNA组、YAP siRNA1组、YAP siRNA2组、YAP siRNA3组细胞,分别提取RNA及蛋白,通过siRNA抑制YAP表达,Western blot、RT-PCR检测siRNA抑制率;实验设对照组、LPS组、YAP siRNA组、YAP siRNA+LPS组,用CCK-8再次检测抑制YAP表达后LPS对A549细胞增殖影响.结果 LPS处理72 h后,与0μg/mL LPS处理后A值比较,0.01、0.1、1μg/mL处理后A值明显增大(P<0.05),0.1μg/mL LPS处理后细胞增殖能力仍最强.Western blot检测发现,与0μg/mL浓度比较,其他浓度的LPS处理A549细胞48 h后,均能上调YAP总蛋白的表达(P<0.05),其中以0.1μg/mL浓度最明显.RT-PCR检测结果显示,与空白组比较,YAP siRNA1组、YAP siRNA2组、YAP siRNA3组YAP mRNA的表达明显降低(P<0.05);与NC siRNA组比较,YAP siRNA1组、YAP siRNA2组、YAP siRNA3组YAP mRNA的表达明显降低(P<0.05).Western blot检测结果与RT-PCR一致,转染YAP siRNA后能够显著抑制A549细胞

作者:杨俊俊;唐敏强;王芳;徐兴祥

来源:医学研究生学报 2017 年 30卷 11期

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作者:
杨俊俊;唐敏强;王芳;徐兴祥
来源:
医学研究生学报 2017 年 30卷 11期
标签:
脂多糖 Yes相关蛋白 A549细胞 细胞增殖 炎症 Lipopolysaccharide Yes-association protein A549 cell Cell proliferation Inflammation
目的 慢性炎症与肿瘤的发生发展密切相关,但具体机制不详.文章旨在探讨脂多糖对肺腺癌A549细胞增殖的影响,并阐明YAP在其中所发挥的作用.方法 培养人肺腺癌A549细胞,应用CCK-8法检测不同浓度LPS对A549增殖的影响,用Western blot、免疫荧光技术检测LPS处理后A549中YAP定量及定位的变化;实验设空白组、NCsiRNA组、YAP siRNA1组、YAP siRNA2组、YAP siRNA3组细胞,分别提取RNA及蛋白,通过siRNA抑制YAP表达,Western blot、RT-PCR检测siRNA抑制率;实验设对照组、LPS组、YAP siRNA组、YAP siRNA+LPS组,用CCK-8再次检测抑制YAP表达后LPS对A549细胞增殖影响.结果 LPS处理72 h后,与0μg/mL LPS处理后A值比较,0.01、0.1、1μg/mL处理后A值明显增大(P<0.05),0.1μg/mL LPS处理后细胞增殖能力仍最强.Western blot检测发现,与0μg/mL浓度比较,其他浓度的LPS处理A549细胞48 h后,均能上调YAP总蛋白的表达(P<0.05),其中以0.1μg/mL浓度最明显.RT-PCR检测结果显示,与空白组比较,YAP siRNA1组、YAP siRNA2组、YAP siRNA3组YAP mRNA的表达明显降低(P<0.05);与NC siRNA组比较,YAP siRNA1组、YAP siRNA2组、YAP siRNA3组YAP mRNA的表达明显降低(P<0.05).Western blot检测结果与RT-PCR一致,转染YAP siRNA后能够显著抑制A549细胞