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目的 观察黄芪甲苷对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控,研究黄芪甲苷抗动脉粥样硬化的作用机制.方法 体外细胞实验中,将小鼠巨噬细胞RAW264.7随机分为5组,即对照组、黄芪甲苷组、康士得组、雷帕霉素组以及siRNA组.分别用黄芪甲苷含药血清、Akt抑制剂康士得、mTOR抑制剂雷帕霉素及mTOR-siRNA体外处理RAW264.7细胞48 h,透射电镜观察巨噬细胞自噬体的变化,免疫荧光法及Westemblotting法检测微管相关蛋白LC3-Ⅱ表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting法检测Akt、mTOR及自噬相关蛋白Beelin 1的表达,ELISA检测RAW264.7细胞分泌炎症因子白细胞介素-4(IL-4)、IL-10、IL-2和γ-干扰素(IFN-γ)水平.体内实验采用HE染色检测各组小鼠主动脉横截面病理损伤程度;qRT-PCR和Western blotting法分别检测小鼠主动脉组织中Akt、mTOR的mRNA和蛋白表达.结果 体外实验结果显示,与对照组比较,黄芪甲苷含药血清组和各抑制剂组细胞透射电镜下观察到自噬体明显增多(P<0.05),LC3-Ⅱ和Beelin1蛋白的表达水平明显上调(P<0.05),而Akt及mTOR的mRNA及蛋白表达水平明显减少(P<0.05),巨噬细胞分泌的IL-10明显降低,而分泌的IFN-γ显著增加(P<0.05).小鼠主动脉HE染色结果显示

作者:张志鑫;李彦杰;秦合伟;任锟;邢若星;韩磊

来源:中草药 2017 年 48卷 17期

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作者:
张志鑫;李彦杰;秦合伟;任锟;邢若星;韩磊
来源:
中草药 2017 年 48卷 17期
标签:
黄芪甲苷 PI3K/Akt/mTOR 巨噬细胞 自噬 抗动脉粥样硬化 astragaloside Ⅳ PI3K/Akt/mTOR macrophage autophagy anti-atherosclerosis
目的 观察黄芪甲苷对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控,研究黄芪甲苷抗动脉粥样硬化的作用机制.方法 体外细胞实验中,将小鼠巨噬细胞RAW264.7随机分为5组,即对照组、黄芪甲苷组、康士得组、雷帕霉素组以及siRNA组.分别用黄芪甲苷含药血清、Akt抑制剂康士得、mTOR抑制剂雷帕霉素及mTOR-siRNA体外处理RAW264.7细胞48 h,透射电镜观察巨噬细胞自噬体的变化,免疫荧光法及Westemblotting法检测微管相关蛋白LC3-Ⅱ表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting法检测Akt、mTOR及自噬相关蛋白Beelin 1的表达,ELISA检测RAW264.7细胞分泌炎症因子白细胞介素-4(IL-4)、IL-10、IL-2和γ-干扰素(IFN-γ)水平.体内实验采用HE染色检测各组小鼠主动脉横截面病理损伤程度;qRT-PCR和Western blotting法分别检测小鼠主动脉组织中Akt、mTOR的mRNA和蛋白表达.结果 体外实验结果显示,与对照组比较,黄芪甲苷含药血清组和各抑制剂组细胞透射电镜下观察到自噬体明显增多(P<0.05),LC3-Ⅱ和Beelin1蛋白的表达水平明显上调(P<0.05),而Akt及mTOR的mRNA及蛋白表达水平明显减少(P<0.05),巨噬细胞分泌的IL-10明显降低,而分泌的IFN-γ显著增加(P<0.05).小鼠主动脉HE染色结果显示