目的：针对雌激素受体（ ER）-α36基因的特异性靶序列，构建并鉴定靶向ER-α36基因RNAi慢病毒载体，研究ER-α36沉默后对胃癌细胞增殖的影响。方法：筛选确定的ER-α36基因RNAi有效靶序列，合成靶序列的Oligo DNA，与慢病毒载体（GV307）连接，测序鉴定。转染293T细胞，包装产生慢病毒，感染胃癌SGC7901细胞株。荧光显微镜下观察SGC7901感染后荧光表达情况，real-time PCR和Western blotting方法检测ER-α36的表达变化。用1×10－10 mol／L的17β-雌二醇处理沉默ER-α36的SGC7901细胞，用细胞计数法观察细胞增殖能力的变化及检测相关下游信号通路分子Src、ERK1／2、cyclin D1表达的变化。结果：阳性克隆PCR及测序证明成功构建慢病毒载体LV-ER-α36-RNAi，倒置显微镜下观察LV-ER-α36-RNAi慢病毒载体感染率达80％以上。 Real-time PCR和Western blotting方法证实四环素（ TeT）诱导下LV-ER-α36-RNAi明显抑制SGC7901细胞内ER-α36 mRNA和蛋白质的表达。与对照组相比，沉默ER-α36的SGC7901细胞增殖能力减弱，Src、ERK1／2、cyclin D1蛋白表达明显降低，Src蛋白活化能力减弱（ P＜0.05）。结论：我们构建的TeT诱导靶向ER-α36的vshRNA慢病毒载体LV-ER-α36-RNAi，可明显沉默ER-α36的表达，为研究ER-α36

作者：王绪明；黄萱；付政祺；邹丰；张尚昆；王兆一；刘丽江

来源：中国病理生理杂志 2014 年 12期