PCR扩增日本血吸虫28 000谷胱甘肽-S-转移酶(Sj28GST)的主要抗原表位与霍乱毒素B亚基(CTB)的融合基因,CTB-Sj28GST经SalⅠ和SphⅠ双酶切后定向克隆至转移质粒pFastBac,构建重组转移质粒pFastBac-CTB-Sj28GST,转化DH10Bac感受态细胞进行基因的同源重组,提取重组病毒,用M13通用引物以及CTB-Sj28GST引物PCR鉴定阳性后转染草地贪夜蛾细胞(Ff9),收集亲代重组病毒反复感染Sf9细胞进行病毒扩增,PCR鉴定重组病毒.重组病毒感染细胞出现病变时,用抗Sj28GST多克隆抗体间接免疫荧光(1FA)鉴定重组蛋白的表达情况,蛋白质印迹(Western blotting)鉴定病毒感染细胞裂解液,分析重组蛋白的抗原性.研究结果表明,Sj28GST含有4个抗原表位,长189 bp,与CTB融合后长519 bp.重组转移质粒pFastBac-CTB-Sj28GST的PCR及序列鉴定与预期一致.印转染细胞获得的重组病毒经PCR鉴定,获得与预期一致的519 bp片段.IFA鉴定表明,重组病毒感染的Sf9细胞呈现绿色荧光,未感染的对照细胞无绿色荧光.Western blotting鉴定在约Mr22 000处有特异性的蛋白条带,与预期目的蛋白大小一致.该重组蛋白能被抗Sj28GST多克隆抗体识别.
作者：徐玉梅；曹士德；朱传刚；张世清
来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019 年 37卷 3期
