目的 探讨在大肠杆菌中表达可溶性重组日本血吸虫谷胱甘肽S-转移酶(rSj26 GST)的优化条件.方法 用含有Sj26基因的原核表达载体pGEX-3X转化大肠杆菌BL21(DE3),将影响可溶性rSj26 GST表达的4个因素,即温度、诱导剂IPTG浓度、诱导时细菌的密度和诱导时间进行正交设计,确定其优化表达条件并大量表达,采用谷胱甘肽亲和层析法纯化表达的蛋白,测定酶活性,通过Western blot鉴定免疫活性.结果 正交设计的直观分析和方差分析结果显示:可溶性rSj26 GST最佳表达条件为温度25 ℃,IPTG的浓度1 mmol/L,诱导前细菌的生长密度0.9,诱导表达时间8 h.可溶性rSj26 GST纯化的产量为16 mg/L,Western blot证实rSj26 GST具有良好免疫原性和免疫反应性.结论 通过正交设计确定了可溶性rSj26 GST在大肠杆菌中表达的优化条件.
作者：余光清；蒋诗琴；李雍龙
来源：中国人兽共患病学报 2006 年 22卷 8期
