目的构建HPV11-E6与人IFNα-2b融合基因表达载体,为进一步原核表达奠定基础.方法在IFNα-2b的起始密码子之前加入ccatggct,同时以编码(G-G-S-G-S)3的45个碱基序列取代其终止密码子,将改造后的人IFNα-2b基因人工合成,然后将其装入质粒pET-32a的NcoⅠ和BamH Ⅰ酶切位点之间;PCR扩增HPV11-E6基因片段.将含有IFNα-2b基因片段的质粒pET-32a和含有BamH Ⅰ,EcoR Ⅰ酶切位点的HPV11-E6同时用BanH Ⅰ,EcoR Ⅰ酶切,将酶切产物纯化回收后做连接反应,连接产物常规转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,随机挑选阳性克隆并提取质粒酶切鉴定,同时将挑选的阳性克隆菌液送公司测序.结果测序结果表明成功的将HPV11-E6和人IFNα-2b通过连接肽(G-G-S-G-S)3连接并装入pET-32a的Nco Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点之间,且基因序列与设计完全一致.结论HPV11-E6与人IFNα-2b融合基因表达载体的成功构建,为进一步原核表达奠定了基础.
作者：相文忠；王飞；李光富；王新军；刘丰；王群；张兆松；毕志刚
来源：中国皮肤性病学杂志 2005 年 19卷 7期
