目的克隆SARS冠状病毒(SARS-CoV)S1基因片段,构建原核表达载体,并在宿主菌中诱导表达带组氨酸标记的融合蛋白.方法人工合成SARS-CoV S1基因片段,克隆至pUCm-T载体,经DNA序列分析和酶切后,将酶切片段亚克隆至原核表达载体pET-28b(+),重组子pET-28b/SARS-S1转化大肠杆菌ril,IPTG诱导表达,Western blot鉴定表达产物;纯化表达产物并用ELISA检测其抗原特异性.结果获得了主要以包涵体形式存在的32kD的目的蛋白,Western blot 鉴定其为带组氨酸标记的融合蛋白,ELISA证明其能与合成肽的抗体及病人血清中的SARS-CoV的抗体特异结合.结论成功构建了SARS-CoV S1基因的组氨酸标记表达载体pET-28b/ SARS-S1,并在ril中得到了高效表达 ;表达的S1蛋白具有较好的抗原特异性,便于免疫动物以获得特异抗体,为SARS-CoV的实验室快速诊断打下了基础.
作者：尹卫国；吴移谋；谭立志；肖建华；杨秋林；张文波；曾桥；万艳平
来源：中国人兽共患病杂志 2005 年 21卷 3期
