为进一步研究人的一新蛋白--蛋白激酶C相关激酶1相关蛋白(AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST-AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备.采用逆转录PCR(RT-PCR)法从人ECV304内皮细胞中扩增AWP1 cDNA编码区,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-KG中.经酶切、序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌BL21,并经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生GST-AWP1融合蛋白,继而纯化获得了分子量约56 kD的融合蛋白.将此融合蛋白免疫新西兰兔,经ELISA和Western 印迹检测获得了效价高、免疫活性强的兔抗人多克隆抗体.结果表明成功构建了GST-AWP1融合蛋白表达载体,在大肠杆菌高效表达了GST-AWP1融合蛋白,并获得高效多抗,为下阶段深入AWP1功能研究提供了重要的基础.
作者：莫永炎；刘亚伟；王静珍；邓鹏；秦清和；杨志刚；姜勇
来源：中国生物化学与分子生物学报 2003 年 19卷 2期
