利用毕赤酵母系统表达具有催化活性的丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白酶.将PCR直接扩增的病毒NS3丝氨酸蛋白酶基因和重组的带有辅酶的单链NS3/NS4A蛋白酶基因,分别插入表达载体pPICZαA的EcoRⅠ和XbaⅠ克隆位点,转化毕赤酵母GS115,可溶性表达NS3蛋白酶和单链NS3/4A蛋白酶;ELISA法测定表达蛋白酶的抗原性;原核高效表达载体pBVIL1表达酶切底物NS5A-B片段,体外与蛋白酶共同温育,SDS-PAGE鉴定蛋白酶催化活性.载体测序结果表明,重组载体pPICZαA/NS3和pPICZαA/NS3/4A中的目的基因序列插入正确;SDS-PAGE结果显示,培养物上清中存在分泌型目的蛋白带;ELISA结果证实,表达蛋白与HCV阳性血清有结合活性;蛋白酶与底物NS5A-B片段不同作用时间的SDS-PAGE,看到约24 kD处底物条带的分解.说明用毕赤酵母表达系统成功地表达了可溶性HCV NS3和单链NS3/4A蛋白酶;两种结构形式的蛋白酶在体外系统中都有催化活性,同时也都具有抗原性.该研究为大量和方便地获得有催化活性的HCV NS3蛋白酶提供了有效途径.
作者：胡巍；凌世淦；宋晓国；刘文；何竞；朱翠侠；陈坤
来源：中国生物化学与分子生物学报 2005 年 21卷 2期
