目的 构建Lipocalin-2(Lcn-2)基凶真核表达质粒PL-2,并榆测其及前期原核表达的重组Lcn-2蛋白对人胚肾细胞HEK293增殖的影响.方法 利用RT-PCR从鼠巨噬细胞RAW264.7中扩增tcn-2基因,克隆人真核表达质粒pEGFP-C1中,构建蓖组质粒PL-2.转染HEK293细胞,通过荧光观察和RT-PCR鉴定Lcn-2基凶的表达.将重组质粒PL-2和前期原核表达的重组Lcn-2蛋白作用于HEK293细胞,通过MTT法检测细胞增殖情况,Western blot法检测细胞增殖核抗原(PCNA)的表达.结果 重组真核表达质粒PL-2经酶切和测序鉴定,证明构建正确.经荧光观察和RT-PCR鉴定,转染重组质粒PL-2的HEK293细胞中有Lcn-2基因的表达.加入重组Lcn-2蛋白后,HEK293细胞较对照组明显增殖,细胞中PCNA的表达也较对照组明显升高,而重组质粒PL-2对HEK293细胞增殖以及细胞中PCNA的表达均无影响.结论 已成功构建了Lcn-2基凶真核表达质粒,其对HEK293细胞的增殖无影响,而原核表达的重组Lcn-2蛋门对HEK293细胞的增殖有一定的促进作用,推测Lcn-2基因的表达产物可能通过与细胞膜受体结合促进HEK293细胞的增殖.
作者：帖儒修；朱道银；李娜；王爽
来源：中国生物制品学杂志 2008 年 21卷 11期
