目的 构建小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2(serine/arginine-rich protein specific kinase 2,SRPK2)基因(srpk2)的真核重组表达质粒,并分析其对微管蛋白α-Tubulin聚合的影响.方法 利用RT-PCR法扩增srpk2的全长cDNA序列,通过分子克隆技术构建真核重组表达质粒pLV-EGFP(2A)Puro-srpk2;在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,将真核重组表达质粒及空载体pLV-EGFP2(A)Puro分别转染人胚肾HEK293T细胞,同时设空白对照组(未转染).采用RT-PCR及Westem blot法分别检测HEK293T细胞中srpk2基因mRNA转录及SRPK2蛋白的表达隋况;Western blot法分析HEK293T细胞中聚合态和游离态α-Tubulin的含量.结果 双酶切及DNA序列鉴定证明真核重组表达质粒pLV-EGFP2(A)Puro-srpk2构建正确,且在HEK293T细胞中实现了srpk2基因过表达.真核重组表达质粒转染组HEK293T细胞中游离态α-Tubulin含量显著低于空载体转染组及空白对照组(P＜0.05),而聚合态α-Tubulin水平明显高于空载体转染组及空白对照组(P＜0.05).结论 成功构建了srpk2基因的真核重组表达质粒,SRPK2可促进α-Tubulin微管蛋白聚合.
作者：温丽敏；白欣艳；王玉晶；赵文静；张蘋；王海龙；郭睿
来源：中国生物制品学杂志 2017 年 30卷 8期
