目的 探讨NOD样受体家族3(NOD-like receptor family 3,NLRP3)炎性体对氧化三甲胺(trimethylamine oxide,TMAO)诱导的大鼠心肌细胞H9c2(2-1)焦亡(pyroptosis)的调控作用.方法 将H9c2(2-1)细胞分别经不同浓度TMAO处理不同时间,CCK-8法检测细胞存活率,确定最适TMAO处理浓度.在此浓度条件下,TMAO分别处理H9c2(2-1)细胞24、48及72 h,同时设对照组(未经TMAO处理的细胞),采用RT-PCR及Western blot检测H9c2(2-1)细胞中NLRP3、白细胞介素-1β(IL-1β)及胱天蛋白酶-1(Caspase-1) mRNA转录和蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞焦亡并确定焦亡时间点.于TMAO组及对照组中加入NLRP3抑制剂MCC950,处理H9c2(2-1)细胞至焦亡时间点,采用同样方法检测相关指标的变化情况,以验证TMAO的促炎作用及NLRP3炎性因子对TMAO诱导的H9c2(2-1)细胞焦亡的调控作用.结果 与对照组比较,300 μmol/L TMAO处理H9c2(2-1)细胞后,24、48及72 h细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05);48 h开始焦亡细胞数显著增加(P<0.05),细胞中NLRP3、IL-1β及Caspase-1 mRNA转录和蛋白表达水平均显著升高(P均<0.05).加入MCC950 48 h,经TMAO处理的H9c2(2-1)细胞焦亡显著减少(P<0.05),NLRP3、IL-1β及Caspase-1 mRNA转录和蛋白表达水平均显著降低(P均<0.05).结
作者:李洁;李萍;李海霞;魏静;阎春生;哈小琴
来源:中国生物制品学杂志 2020 年 33卷 6期