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本研究旨在探讨慢病毒介导的CAV1过表达对HL-60细胞增殖与凋亡的影响.构建慢病毒重组表达载体pcDNA-EF1-CAV1,并与pPACK包装质粒混合物共转染至293TN细胞后,收集病毒液感染HL-60细胞,使CAV1基因在细胞中稳定转染并高表达.采用Western blot方法评价转染后HL-60 CAV1蛋白表达情况.采用CCK-8法、流式细胞术分别检测转染前后HL_60细胞的增殖活性和凋亡情况.结果表明:PCR阳性克隆筛选及核苷酸测序结果证实CAV1基因正确插入表达载体pcDNA-EF1-GFP中.重组慢病毒颗粒Lv-CAV1成功转染HL-60细胞,转染率达90%.Western blot检测结果显示,转染后48 h HL-60细胞中CAV1蛋白表达明显增高.CCK-8检测结果显示转染后48 h HL-60细胞增殖活性降低(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示转染后HL-60细胞凋亡率明显增加(P<0.01).结论:CAV1过表达对HL-60细胞具有抑制细胞的增殖活性、促进细胞凋亡的作用.

作者:马微;王迪迪;王昭;朱贵明;张鹏霞

来源:中国实验血液学杂志 2013 年 21卷 4期

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作者:
马微;王迪迪;王昭;朱贵明;张鹏霞
来源:
中国实验血液学杂志 2013 年 21卷 4期
标签:
CAV1 HL-60 慢病毒 细胞增殖 细胞凋亡 caveolin-1 HL-60 lentivirus overexpression proliferation apoptosis
本研究旨在探讨慢病毒介导的CAV1过表达对HL-60细胞增殖与凋亡的影响.构建慢病毒重组表达载体pcDNA-EF1-CAV1,并与pPACK包装质粒混合物共转染至293TN细胞后,收集病毒液感染HL-60细胞,使CAV1基因在细胞中稳定转染并高表达.采用Western blot方法评价转染后HL-60 CAV1蛋白表达情况.采用CCK-8法、流式细胞术分别检测转染前后HL_60细胞的增殖活性和凋亡情况.结果表明:PCR阳性克隆筛选及核苷酸测序结果证实CAV1基因正确插入表达载体pcDNA-EF1-GFP中.重组慢病毒颗粒Lv-CAV1成功转染HL-60细胞,转染率达90%.Western blot检测结果显示,转染后48 h HL-60细胞中CAV1蛋白表达明显增高.CCK-8检测结果显示转染后48 h HL-60细胞增殖活性降低(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示转染后HL-60细胞凋亡率明显增加(P<0.01).结论:CAV1过表达对HL-60细胞具有抑制细胞的增殖活性、促进细胞凋亡的作用.