目的：通过基因工程手段在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白 HSP65-PEAⅠ，建立小鼠实验模型，检测其抗体效价水平，初步评价免疫效果。方法扩增 HSP65-PEAⅠ片段插入表达载体 pET-28a 中，转化 E．coli BL21（DE3），IPTG 诱导表达，优化纯化条件，以 HSP65-PEAⅠ为免疫原对小鼠进行免疫接种。结果双酶切和测序鉴定结果证实 HSP65-PEAⅠ成功克隆入 pET-28a 载体中，表达的重组蛋白相对分子量约为97000，主要以包涵体形式表达，纯化后的重组蛋白纯度达90％，浓度为0．498 mg／ml。免疫小鼠均在首免1周后采集的血清中检测到特异性抗体，抗体效价水平持续增长且在42天均达到了210。结论成功在 E．coli 中表达并经过纯化得到重组蛋白 HSP65-PEAⅠ，确定了动物免疫程序，为制备抗烧烫伤多器官衰竭疫苗奠定了基础。
作者：何苗；张国利；陈萍；田园；岳玉环；吴广谋；于佳；史飞；侯天全
来源：中国实验诊断学 2015 年 5期
