目的 探讨脂多糖(LPS)诱导大鼠肝细胞内质网应激(ERS)过程中硫氧还蛋白-1(Trx-1)的变化及其作用机制.方法 ①体外培养大鼠肝细胞株BRL,取部分细胞,分别用0.1、1.0、5.0、10.0、20.0 mg/L LPS处理细胞12h;另取部分细胞,用10.0 mg/L LPS分别处理细胞l、3、6、12、24 h;均以LPS溶剂磷酸盐缓冲液(PBS)为对照,从量效和时效的角度观察LPS对Trx-1蛋白表达和ERS的影响.②体外培养大鼠肝细胞株BRL,分为溶剂对照组、阴性小干扰RNA(siRNA)对照组、Trx-1 siRNA对照组、LPS刺激组、阴性siRNA+LPS组、Trx-1siRNA+LPS组,Trx-1 siRNA或阴性siRNA转染24 h后用10.0 mg/L LPS作用12h,观察Trx-1是否参与LPS诱导大鼠肝细胞ERS.用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测Trx-1、硫氧还蛋白还原酶(TrxR)和硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)的蛋白表达,ERS标志性蛋白葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12(caspase-12)以及细胞凋亡执行蛋白caspase-3及其底物多聚二磷酸腺苷聚合酶-1(PARP-1)裂解片段的表达;采用细胞计数试剂盒检测细胞活性.结果 ①与溶剂对照组比较,LPS可诱导大鼠肝细胞Trx-1和TrxR蛋白表达上调、TXNIP蛋白表达下调,引起ERS相关蛋白GRP78、caspase-12上调,抑制细胞活性,且具有一定的剂量和时间依赖效应

作者：王涛；费成平；王宇；刘晓珍；刘夷嫦；刘国庆；闫骏；谷振勇

来源：中华危重病急救医学 2016 年 28卷 4期