目的：探讨细胞自噬对脂多糖（LPS）介导血管通透性增加的影响。方法①体外实验：将人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分为空白组、LPS组（LPS5mg/L刺激）、自噬抑制剂6-氨基-3-甲基嘌呤（3-MA）+LPS组（5mmol/L3-MA预处理30min+LPS5mg/L刺激）及自噬诱导剂雷帕霉素（RAP）+LPS组（10nmol/LRAP预处理30min+LPS5mg/L刺激）。4组于LPS刺激60min后检测跨内皮细胞电阻（TER）以反映内皮通透性；采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测自噬标志性蛋白微管相关蛋白轻链3（LC3Ⅱ/Ⅰ）和自噬相关基因Beclin-1的蛋白表达；采用流式细胞仪检测内皮细胞凋亡情况；采用荧光法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）活性。②体内实验：将24只SD大鼠按随机数字表法分为4组，每组6只。对照组不予任何处理；模型组经尾静脉注射LPS10mg/kg；3-MA预处理组及RAP预处理组经尾静脉注射3-MA10mg/kg或RAP2mg/kg预处理30min后再注射LPS10mg/kg。荧光显微镜下观察肠系膜微静脉内荧光白蛋白的渗出情况，并计算血管内外荧光强度变化值（ΔI）以反映血管通透性。结果①在细胞水平，LPS组LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、caspase-3活性及细胞凋亡率均较空白组明显增加，TER值明显降低。与LPS组比较，3-MA+LPS组LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、caspase-
作者：王盛标；殷爽；李云峰；李翠玲；李涛；刘友坦
来源：中华危重病急救医学 2016 年 28卷 8期
