目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT对马兜铃酸(AA)诱导引起肾小管上皮细胞表型转化与胶原累积的作用及分子机制。方法将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E分为正常细胞对照组、AA 10 mg·L-1组、AA 10 mg·L-1+DAPT1和10μmol·L-1组。24 h后,实时荧光定量PCR检测Notch信号关键分子Notch1、Jagged1和Numb、表型转化相关分子转化生长因子β1(TGF-β1)、E-钙黏着蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨形态发生蛋白7(Bmp7)和基质成分Ⅰ型胶原a1(Col1a1)和Ⅲ型胶原a1(Col3a1) mRNA的表达;细胞免疫荧光染色法检测Notch1、Jagged1、α-SMA和Col3a1蛋白的表达。结果与正常细胞对照相比,AA处理后,肾小管上皮细胞基质相关因子TGF-β1,α-SMA和Col3a1 mRNA表达上调,上皮标志物E-钙黏着蛋白mRNA的表达受到抑制,而且导致了Notch1、Jagged1 mRNA表达的上调和Numb mRNA表达的下调(P<0.05),提示AA促进肾小管上皮细胞表型转化与基质累积,同时激活了Notch信号通路。DAPT干预AA作用后,Notch1(P<0.01)和Jagged1(P<0.05)的mRNA表达下调,Numb mRNA表达上调(P<0.05),说明DAPT抑制了AA诱导的Notch信号通路活化。此外,与AA损伤组相比,DAPT也降低了TGF-β1,α-SMA,Col1a1和Col3a1 mRNA表达(P<
作者:洪炜龙;陆红;吴存造;夏鹏;陈必成;白永恒
来源:中国药理学与毒理学杂志 2016 年 30卷 3期