目的：分析微RNA-129（miR-129）表达对食管鳞癌（ESCC）细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能的分子机制。方法构建miR-129过表达载体（pGCMV/EGFP/miR-129）和对照载体（pGCMV/EGFP/miR-NC），分别稳定转染ESCC细胞Eca109和EC9706，实时定量PCR检测miR-129表达水平；MTT法、克隆形成实验和流式细胞术分别检测miR-129表达对食管癌细胞体外增殖活性、细胞凋亡率和细胞周期的影响；构建含有Bcl-2基因3′-UTR野生和突变序列的荧光素酶报告基因载体，分别与pGCMV/EGFP/miR-129共转染人ESCC细胞Eca109，双重荧光素酶报告基因实验分析荧光素酶活性变化；Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、激活型胱天蛋白酶3及总胱天蛋白酶3蛋白表达水平。结果 miR-129过表达可显著抑制食管癌细胞增殖（P<0.01），增加细胞凋亡率（P<0.05），并诱导细胞G0/G1期比例增加和S期比例降低（P<0.05），G2/M期比例则无显著变化。荧光素酶报告基因实验分析结果表明，miR-129可显著降低含有Bcl-2基因3′-UTR野生序列的荧光素酶活性，而不降低含有Bcl-2基因3′-UTR突变序列的荧光素酶活性。Western蛋白质印迹法检测结果提示，miR-129过表达可显著降低ESCC细胞中Bcl-2蛋白表达，增加激活型胱天蛋白酶3蛋白水平（P<0.05），总胱天蛋白酶3蛋白
作者：李青峰；高燕萍；吴勉华
来源：中国药理学与毒理学杂志 2016 年 30卷 5期
