目的 探讨特异性的短发夹状RNA(shRNA)沉默肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因及抑制细胞凋亡的作用效果.方法 构建针对大鼠TNF-α基因编码区的短发夹状RNA真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-TNF-α shRNA,采用电穿孔的方法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定的表达TNF-α shRNA的细胞系.实验分为3组,(1)正常对照组:未转染的RK3E细胞;(2)阴性对照组:转染空载体pRNAT-U6.1的RK3E细胞系;(3)实验组:转染TNF-α shRNA的RK3E细胞系.经脂多糖(LPS)孵育12 h后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测mRNA的表达.结果 成功构建大鼠TNF-α基因的短发夹状RNA真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-TNF-α shRNA;经LPS刺激后,与正常对照组和阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率显著降低(P＜0.01),TNF-α的mRNA含量显著降低(P＜0.05).结论 针对TNF-α的特异性短发夹RNA可以明显引起靶基因的沉默,进而抑制LPS诱导的RK3E细胞凋亡.
作者：陈栋；张艳；朱珉；陈刚；张伟杰；陈知水；陈实
来源：中国医师杂志 2007 年 9卷 11期
