目的:考察PC12细胞内自噬发生与缺氧时间的关系,探讨自噬对缺氧细胞的影响作用.方法:以PC12细胞为模型,将对数生长期的细胞加入96孔培养板,37℃、5％ CO2培养24h后,放入0.5％O2、94.5％ N2和5％ CO2的培养箱缺氧1h、3h、6h、9h、12h、24h、36 h和48h,用MTT法检测细胞存活率,透射电镜观察细胞内自噬体,Westen blot法检测自噬相关蛋白(LC3B、Atg5和Beclint)的表达,用试剂盒检测细胞内乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧自由基(ROS)和线粒体膜电位(MNP)水平,探究缺氧不同时间自噬对PC12细胞的作用.结果:在缺氧3～12h,PC12细胞自噬明显增加,自噬相关蛋白(LC3B、Atg5和Beclin1)表达增加,尤其是缺氧9h,PC12细胞存活明显增加,表明短时间缺氧自噬对细胞起保护作用,而随着缺氧时间的延长细胞存活明显降低,自噬相关蛋白表达水平减少,细胞LHD和ROS水平明显增加.MMP水平显著下降,细胞凋亡明显增加.结论:在缺氧早期自噬对PC12细胞起保护作用,但缺氧时间较长,超过了细胞自身调节能力导致细胞死亡.
作者：胡中慧；马慧萍；樊鹏程；李加恒；王俊丽；蒙萍；贾正平
来源：中国应用生理学杂志 2017 年 33卷 1期
