目的:探究miR-135b-5p在小鼠脓毒症(sepsis)引起的急性肺损伤(ALI)模型中的表达水平及其对小鼠肺部炎症反应和细胞焦亡的影响.方法:将C57BL/6小鼠随机分为6组,每组8只,通过盲肠结扎穿刺法(CLP)手术构建CLP诱导的脓毒症小鼠模型:腹腔注射0.1 mg/kg的巴比妥麻醉,腹部纵向切开暴露盲肠,结扎盲肠并用注射器针头进行穿孔,挤出部分肠道内容物后缝合伤口.假手术组(Sham组)开腹后不做任何处理缝合伤口,无CLP 手术处理.治疗组分为 CLP+NC mimic 组,CLP+miR-135b-5p mimic 组,CLP+NC mimic+empty vector 组,CLP+消皮素D(GSDMD)组,CLP+miR-135b-5p mimic+GSDMD组.治疗组小鼠在CLP手术前一周皮下注射200μ1溶解于生理盐水的 NC mimic(200 nmol/L),miR-135b-5p mimic(200 nmol/L),empty vector(100 nmol/L),GSDMD vector(100 nmol/L),每天注射1次,连续一周.术后24 h采用二氧化碳窒息法实施安乐死.采用qRT-PCR检测小鼠肺组织样本中miR-135b-5p和GSDMD mRNA的表达水平;苏木精-伊红(HE)染色检测小鼠肺组织形态和损伤状态;采用5 ml生理盐水冲洗小鼠右肺3次,每次持续约3～5 min,收集肺泡灌洗液(BALF),酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中GSDMD、白介素1 β(1L-1β)和白介素18(IL-18)的表达水平;蛋白免疫印迹

作者：臧宾宾；李华；杨颖；谢航；徐晓婷

来源：中国应用生理学杂志 2022 年 38卷 4期