目的:研究神经前体细胞表达发育调控样基因4(neural precursor cell-expressed developmentally down-regulated gene 4-like,
NEDD4
L)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响及其可能的分子机制。
方法:采用Lipofectamine2000分别将靶向
NEDD4
L的小干扰RNA、
NEDD4
L的过表达质粒(pcDNA3.1-
NEDD4
L-HA)、HBV复制质粒(pGEM-HBV1.3)和poly(dAT:dAT)瞬时转染至HepG2细胞,并以可稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测
NEDD4
L、α干扰素、β干扰素、干扰素刺激基因56(interferon-stimulated gene 56,
ISG56)、黏液病毒抗性蛋白A(myxovirus resistance protein A,
MxA)、寡腺苷酸合成酶(oligoadenylate synthetase,
OAS)等的mRNA水平,以及HBV DNA和3.5 kb HBV RNA的表达水平;采用蛋白质印迹法验证NEDD4L沉默或过表达效果,并检测相关信号分子的蛋白质水平;采用酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中β干扰素产量。统计学方法采用
t检验。
结果:HepG2.2.15细胞中的NEDD4L mRNA和蛋白质水平分别为10.53±0.47和4.17±0.43,分别高于HepG2细胞中的1.00±0
作者:陈邦涛;冯旭娇;杨青青;刘明社;赵中夫;张芸
来源:中华传染病杂志 2020 年 38卷 8期