目的 研究羧甲基壳聚糖(CMCS)对一氧化氮诱导大鼠软骨细胞凋亡的保护作用,并探索PI3K/Akt信号转导通路在该过程中的作用及其机制.方法 体外培养大鼠膝关节软骨细胞,通过Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定软骨细胞;3 mmol/L硝普钠诱导软骨细胞构建凋亡模型;实验分为空白对照组、硝普钠诱导凋亡组、硝普钠+不同浓度CMCS处理组、硝普钠+CMCS+PI3K抑制剂Wortmannin处理组.通过细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)对软骨细胞增殖活性进行检测,流式细胞技术检测软骨细胞凋亡率,荧光定量PCR检测软骨细胞内MMP-13及基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1 mRNA的表达水平,通过蛋白印迹法检测软骨细胞内Akt及p-Akt表达水平,采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 3 mmol/L硝普钠可以抑制软骨细胞增殖活性(吸光度值0.221±0.023),与对照组(0.736±0.032)比较降低70％(F=8.203,P=0.021),诱导软骨细胞发生早期凋亡,早期凋亡率为(68.8±5.2)％;增加软骨细胞内MMP-13 mRNA表达,降低TIMP-1 mRNA表达;加入CMCS后软骨细胞增殖活性有所增加,软骨细胞凋亡降低,凋亡率降低为(14.7±2.3)％;并且CMCS可以激活硝普钠诱导软骨细胞内Akt激活,增加p-Akt蛋白表达水平,CMCS可以恢复硝普钠诱导软骨细胞内MMP-13 mRNA增加及TIMP-1 mRNA降低.结论 CMCS对硝
作者：贺斌；陶海鹰；卫爱林；刘世清；陈庆；丁万军
来源：中华风湿病学杂志 2015 年 19卷 3期
