目的 构建带绿色荧光蛋白(GFP)标签的丝氨酸-苏氨酸激酶1(LKB1)慢病毒过表达细胞株,观察其在哺乳动物细胞内的表达和定位以及相关功能影响.方法 构建出慢病毒表达质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体(pCDH-LKB1)并筛选慢病毒细胞株.运用免疫荧光及Western blot检测其在哺乳动物细胞中的定位与表达.同时使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测LKB1对细胞活性的影响.结果 成功构建LKB1慢病毒细胞株,荧光定位实验表明LKB1在人成骨肉瘤细胞细胞的细胞质细胞核均有分布;Western blot法检测表明LKB1在真核细胞中能有效表达.CCK-8检测显示,转染48 h后,对照组1.131±0.003,LKB1组0.739±0.051,LKB1组相比于对照组,活性降低,两组差异有统计学意义(P =0.001).结论 成功构建过表达带绿色荧光蛋白标签的LKB1蛋白(GFP-LKB1)的细胞株,LKB1过表达明显抑制肿瘤细胞的活性.
作者：徐卿；李洪涛；林峰；姚阳
来源：中华实验外科杂志 2018 年 35卷 2期
