目的:探讨下调微小RNA(miRNA,miR)-21与肾癌细胞舒尼替尼敏感性的相关性及其机制。方法:应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人肾癌细胞株786-O、ACHN和正常肾小管上皮细胞株HK-2中miR-21的表达。脂质体Lipofectamine 2000瞬时转染miR-21抑制剂及阴性对照无义序列至肾癌细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,并计算转染前后舒尼替尼24 h半数抑制浓度(IC
50)。RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)验证miR-21对第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)表达的影响。应用SPSS 20.0和GraphPad prism 7.0软件分析,两组间比较采用
t检验。
结果:与HK-2比较,miR-21在786-O(0.005±0.001比1.001±0.063,
t=27.269,
P<0.01)、ACHN(0.005±0.001比0.257±0.060,
t=7.218,
P<0.01)中呈显著高表达。舒尼替尼对转染前后786-O、ACHN的24 h IC
50分别为16.52、4.79 μmol/L;15.31、3.66 μmol/L。miR-21抑制剂组PTEN mRNA表达水平显著高于空白对照组(786-O:5.295±1.088比1.005±0.119,
t=6.789,
P<0.01;ACHN:3.248±0.720比1.017±0.220,
t=5.135,
P<0.01)及无义对照序列组(786-O:5.295±1.088比0.96
作者:姚文涛;葛余正;周昌成;许露伟;吴然;贾瑞鹏
来源:中华实验外科杂志 2020 年 37卷 5期