目的 观察肾小管上皮细胞转分化过程中PTEN的表达和分布,并研究上调DJ-1对PTEN表达和分布及PI3K-Akt通路活化的影响.方法 以人肾小管上皮细胞为研究对象,10 μg/L TGF-β1刺激72 h诱导人肾小管上皮细胞转分化;Western印迹法检测正常组和TGF-β1干预组细胞内PTEN、E-cadherin和α-SMA蛋白表达;RT-PCR法检测两组细胞内PTEN mRNA表达水平.脂质体法介导pEGFP-N1-DJ-1或空载体转染人肾小管上皮细胞,倒置荧光显微镜和Western印迹鉴定转染效率后,Western印迹法检测正常组、pEGFP-N1-DJ-1转染组和空载体转染组细胞内PTEN蛋白表达;RT-PCR法检测各组细胞内PTEN mRNA表达.pEGFP-N1-DJ-1转染前1 h用PI3K抑制剂LY294002预处理,Western印迹检测正常组、pEGFP-N1-DJ-1转染组和空载体转染组及LY294002预处理1 h后pEGFP-N1-DJ-1转染组的p-Akt和Akt蛋白的表达.激光共聚焦显微镜下观察正常组、TGF-β1干预组和pEGFP-N1-DJ-1转染组细胞内PTEN蛋白的分布.结果 正常组细胞表达E-cadherin和PTEN,几乎不表达α-SMA;TGF-β1干预组α-SMA表达显著高于正常组(P＜0.05),而E-cadherin表达显著低于正常组(P＜0.05),PTEN mRNA和蛋白表达均显著低于正常组(P＜0.05).pEGFP-N1-DJ-1和空载体转染后,细胞绿色荧光表达均在80

作者：位红兰；曾锐；张娟；罗昀；刘林；徐钢

来源：中华肾脏病杂志 2009 年 25卷 10期