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目的 观察megsin基因转染对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)、磷酸化胞外调节蛋白激酶112(pERK1/2)、转化生长因子β1(TGF-β1)的表达及Ⅳ型胶原水平的影响;探讨megsin基因对细胞外信号调节激酶(ERK)通路的作用.方法 将小鼠肾小球系膜细胞分为7组:低糖组(A组,5.5 mmol/L)、高糖组(B组,30 mmol/L)、高糖+空质粒组(C组)、高糖+megsin质粒组(D组)、高糖+megsin质粒+ERK通路抑制剂组(E组)、高糖+megsin siRNA组(F组)和低糖+甘露醇组(24.5 mmol/L甘露醇,G组).分别在培养12、24、48 h后,采用Western印迹法测定各组系膜细胞megsin、PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1 的表达,放射免疫测定法(RIA)测定各组细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度.结果 与A组相比,高糖刺激可上调系膜细胞megsin、PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1的表达及上清液Ⅳ型胶原的水平(均P<0.05),且有一定的时间依赖性.转染megsin基因可进一步上调高糖环境下系膜细胞PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1、Ⅳ型胶原的表达(均P<0.05).应用ERK通路抑制剂后,与D组相比系膜细胞megsin和PDGF-BB的表达无明显变化(均P>0.05),而pERK1/2、TGF-β1 及Ⅳ型胶原的表达则明显降低(均P<0.05).转染megsin siRNA对系膜细胞megsin基因进行干扰后,系膜细胞PDGF-BB

作者:王保兴;李英;郭冬华;史永红;迟雁青;刘茂东

来源:中华肾脏病杂志 2011 年 27卷 4期

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作者:
王保兴;李英;郭冬华;史永红;迟雁青;刘茂东
来源:
中华肾脏病杂志 2011 年 27卷 4期
标签:
转染 肾小球系膜细胞 细胞外信号调节MAP激酶类 Megsin 葡萄糖 Transfection Glomerular mesangial cells Extracellular signal-regulated MAP kinases Megsin Glucose
目的 观察megsin基因转染对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)、磷酸化胞外调节蛋白激酶112(pERK1/2)、转化生长因子β1(TGF-β1)的表达及Ⅳ型胶原水平的影响;探讨megsin基因对细胞外信号调节激酶(ERK)通路的作用.方法 将小鼠肾小球系膜细胞分为7组:低糖组(A组,5.5 mmol/L)、高糖组(B组,30 mmol/L)、高糖+空质粒组(C组)、高糖+megsin质粒组(D组)、高糖+megsin质粒+ERK通路抑制剂组(E组)、高糖+megsin siRNA组(F组)和低糖+甘露醇组(24.5 mmol/L甘露醇,G组).分别在培养12、24、48 h后,采用Western印迹法测定各组系膜细胞megsin、PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1 的表达,放射免疫测定法(RIA)测定各组细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度.结果 与A组相比,高糖刺激可上调系膜细胞megsin、PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1的表达及上清液Ⅳ型胶原的水平(均P<0.05),且有一定的时间依赖性.转染megsin基因可进一步上调高糖环境下系膜细胞PDGF-BB、pERK1/2、TGF-β1、Ⅳ型胶原的表达(均P<0.05).应用ERK通路抑制剂后,与D组相比系膜细胞megsin和PDGF-BB的表达无明显变化(均P>0.05),而pERK1/2、TGF-β1 及Ⅳ型胶原的表达则明显降低(均P<0.05).转染megsin siRNA对系膜细胞megsin基因进行干扰后,系膜细胞PDGF-BB