目的 构建表达结核分枝杆菌CFP-10/ESAT-6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌,并观察其对巨噬细胞的作用.方法 采用SOE法构建CFP-10/ESAT-6融合基因,克隆入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭载体pMV261中,将重组质粒电转化耻垢分枝杆菌,SDS-PAGE检测CFP-10/ESAT-6融合蛋白在重组耻垢分枝杆菌中的表达.以重组耻垢分枝杆菌感染小鼠巨噬细胞ANA-1,半定量RT-PCR检测ANA-1细胞一氧化氮合成酶的表达水平.结果 经DNA测序证实CFP-10/ESAT-6融合基因序列正确.重组耻垢分枝杆菌经热诱导后可以表达相对分子质量(Mr)约为18×103的融合蛋白,与预期值一致.重组耻垢分枝杆菌能够诱导小鼠巨噬细胞表达一氧化氮合成酶.结论 表达CFP-10/ESAT-6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌构建成功,该重组耻垢分枝杆菌能够活化巨噬细胞,具有抗原性,为研制结核疫苗提供一定参考.
作者：李岩；鲍朗；张会东；商正玲；钟琪；李娅莎
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2006 年 26卷 12期
