目的：明确以流式细胞术同时检测 caspase-1与碘化丙啶或 AnnexinⅤ的方法测定小鼠骨髓巨噬细胞炎性死亡的可行性。方法从野生型(wild type,WT) C57BL/6小鼠和/或 C57BL/6背景的 caspase-1-/-小鼠分离骨髓细胞,巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor, M-CSF)刺激分化7 d 成为骨髓巨噬细胞后,分别进行磷酸盐缓冲液(PBS)、脂多糖(LPS)、LPS+ATP (三磷酸腺苷)处理。蛋白印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞和上清中的 IL-1β和 caspase-1的切割成熟及分泌情况；乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测试剂盒检测细胞上清 LDH 的释放量；以3种流式细胞染色法：TMR red+caspase-1、PI(propidium iodide)+caspase-1和 AnnexinⅤ+caspase-1检测小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡。结果 LPS+ATP 处理后,NLRP3炎症小体被激活(细胞和上清中有 IL-1β和 caspase-1的切割成熟和分泌)；WT 即 C57BL/6组细胞上清 LDH 的释放量多于 caspase-1-/-组,表明诱导发生的细胞死亡中存在依赖于 caspase-1的炎性死亡方式；流式细胞术同时检测 caspase-1与 PI 或 AnnexinⅤ,结果显示 LPS+ATP 处理组炎性死亡的百分比显著高于 PBS 组和 LPS 组,与已报道的

作者：刘雪；陈丽香；李顺；周晓辉

来源：中华微生物学和免疫学杂志 2016 年 36卷 2期