目的 对1例凝血因子Ⅷ(FⅧ)Trp1707Ser突变患者相关抑制物的结合作用机制进行探讨.方法 对患者进行APTT、PT、纤维蛋白原和FⅧ活性(FⅧ∶C)等血友病A相关检测；Bethesda法进行FⅧ抑制物检测；采用长链PCR(LD-PCR)和两组序列特异的PCR分别进行FⅧ基因内含子22倒位和内含子1倒位检测；采用核酸直接测序法对患者FⅧ基因各外显子及其侧翼序列进行检测；分别将含抑制物血浆与FⅧ重链及其片段(A1、A2)、轻链及其片段(A3、C1和C2)进行反应,加入等体积正常人混合血浆纠正后测定剩余FⅧ∶C.以FⅧ片段作为抗原,生物素标记的经纯化的抑制物作为抗体与之反应,Western blot法进一步验证抑制物与FⅧ各片段的结合反应.结果 患者FⅧ∶C为1.1％,临床诊断为血友病A,Bethesda法检测其体内FⅧ抑制物滴度达18.4 BU,基因分析发现患者FⅧ基因14号外显子存在错义突变c.97223C＞ G(p.Trp1707Ser).纠正试验法检测显示含抑制物血浆分别与重链和轻链反应后,剩余FⅧ∶C均有升高,且与重链反应时升高更明显；与重链的A2和轻链的C2片段反应后,也出现了剩余FⅧ∶C升高.以还原变性的B区缺失重组FⅧ、A2和C2作为抗原,抑制物作为抗体时Western blot均能检测到相应条带,且重链相应的条带更深.结论 FⅧTrp1707Ser突变相关抑制物结合FⅧ的位点位
作者：吴希；陆晔玲；丁秋兰；戴菁；奚晓东；王鸿利；王学锋
来源：中华血液学杂志 2013 年 34卷 8期
