目的:观察D-半乳糖(D-galactose,D-gal)对骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)衰老的影响,构建体外MSCs衰老诱导模型.方法:分离SD大鼠(7日龄)MSCs,传代培养至第3代后,细胞随机分为4组:分别为正常对照组,1 g/L,10 g/L和50 g/L D-gal衰老诱导组.对照组在正常的DMEM培养液中继续培养;诱导组MSCs分别在含1 g/L、10 g/L、50 g/L D-gal的DMEM培养液中培养48 h.各组细胞培养结束后,衰老相关β-半乳糖苷酶染色法观察细胞衰老变化、Western blot法检测衰老相关蛋白p53、p21和p16表达,AO/EB双染法检测细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖,超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量检测细胞内氧化应激水平.结果:10 g/L和50 g/L D-gal诱导组衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数较对照组显著升高(P＜0.01),衰老相关蛋白p53、p21和p16表达明显增高:AO/EB染色结果显示50 g/L D-gal诱导组细胞凋亡率较对照组显著升高(P＜0.01);MTr检测结果表明10 g/L和50 g/L D-gal均能抑制MSCs增殖活性,而10 g/L和50 g/L D-gal诱导组MSCs内SOD活力较对照组明显降低(P＜0.01),MDA含量显著升高(P＜0.01).结论:10 g/L和50 g/L D-gal均可诱导MSCs发生衰老变化,并促使细胞内衰老相关蛋白p53、p21和p16表达增加,细胞存活能力减弱,增殖能力

作者：颜冰希；余姗姗；冯晓；吴冬玲；蔡昕筱；周倩沁；何晓敏；陈爱嫩；张大勇

来源：浙江大学学报（医学版） 2013 年 42卷 6期