[目的]探讨膜反向斑点杂交法在广东人G6PD基因6种常见突变同步检测中的应用.[方法]用高铁血红蛋白还原试验和G6PD/6-PGD酶活性比值法进行G6PD缺乏症筛查.应用多重PCR方法扩增G6PD基因目的片段.用Premier Primer6.0软件设计和优化针对广东人常见6种G6PD基因突变型的特异性寡核甘酸探针,用乙基-3-二甲氨基丙碳二亚胺(EDC)法处理尼龙膜并固定探针,制成G6PD基因突变检测用膜条.多重PCR扩增产物与固定在膜条上寡核苷酸探针进行杂交,通过显色反应判读结果.以C6PD基因测序为金标准,对膜反向斑点杂交法进行评价.[结果]26例标本中膜反向斑点杂交法检测结果:95 A→G突变型5例,1024C→T突变型3例,1376 G→T突变型8例,1388G→A突变型7例,392 G→T突变型l例,未发现1311C→T突变型,有两例检测为阴性.膜反向斑点杂交法未能测出的2例标本经基因测序证实存在392G→T突变,其余24例膜反向斑点法与基因测序法的结果完全一致,符合率为92.3％(24/26).[结论]在优化探针设计和杂交条件前提下,膜反向斑点杂交法可用于广东人G6PD基因6种常见突变型的同步检测.
作者：郑卫东；张太松；陈冬；葛艳芬；林婷；胡斌
来源：中山大学学报（医学科学版） 2011 年 32卷 4期
