目的：构建P53凋亡刺激蛋白（ASPP）家族的抑制成员iASPP的真核表达载体，并将其通过脂质体转染到结肠癌细胞株SW480及Lovo中，观察转染前后iASPP 表达变化及其对细胞凋亡的影响。方法将解放军第十六医院检验科经测序鉴定的pMD19-T-iASPP质粒亚克隆至真核表达质粒pcDNA3．1（＋），构建重组真核表达质粒pcDNA3．1（＋）-iASPP ，测序鉴定后用脂质体将重组质粒转染至结肠癌细胞株SW480及Lovo中，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测iASPP的表达以及用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化情况。结果重组表达质粒pcDNA3．1（＋）-iASPP ，经酶切测序与GenBank上记录的人iASPP cDNA序列（gi 60457962）完全一致。经pcDNA3．1（＋）-iASPP质粒转染的结肠癌细胞株SW480及Lovo的iASPP mRNA表达增高，细胞凋亡率下降。结论成功构建了重组表达质粒pcDNA3．1（＋）-iASPP ，并成功在结肠癌细胞株SW480及Lovo中获得了表达，细胞株的凋亡率下降，提示抑制iASPP高表达有可能成为恢复P53抑癌功能的新策略。
作者：陈杰；杨益民；杨靓靓；杨婷；蔡云；辛海明；刘泽军
来源：重庆医学 2013 年 35期
