本研究将重组大肠杆菌E． coli BL21（DE3）／pET30α（＋）-NADK作为NAD激酶生产菌种，对其产酶发酵培养基及发酵条件进行优化。采用Placket-Burman（PB）设计先筛选出影响重组菌产NAD激酶的三个主要因素：葡萄糖浓度、MgSO4浓度和诱导表达时间，试验结果表明，增加葡萄糖和MgSO4的浓度及缩短诱导表达时间对产酶有利。根据中心组合实验设计（Central Composite Design，CCD）原理，利用PB设计确定的这三个显著影响因素，通过最陡爬坡实验逼近最大响应区域，挑选出实验范围内的最优点，以此作为响应面中心组合设计的中心点，用NAD激酶酶活作为响应值，使用Design Expert 8．0软件设计中心组合实验，通过对实验数据进行分析，得出最佳发酵培养基成分及发酵条件为：葡萄糖14．24 g／L、酵母粉8 g／L、胰蛋白胨8 g／L、MgSO40．94 g／L、NaCl 5 g／L、NH4 Cl 2 g／L、KH2 PO42 g／L、K2 HPO49 g／L，诱导表达时间8．34 h，接种量2％。在此最佳条件下，NAD激酶酶活实验验证值可达10．17 U／mg，与优化前相比提高了2．77倍。对诱导表达结束后的细胞上清液进行分析也证明优化取得了显著的效果。
作者：侯堃；李红梅
来源：工业微生物 2015 年 3期
