目的:以psiCHECK-2质粒为骨架,构建带有远红外荧光蛋白mLumin和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)的双荧光蛋白报告基因质粒psiCHECK-2-eGFP-mLumin.方法:PCR扩增mLumin和eGFP基因片段,分别取代海肾荧光素酶和萤火虫荧光素酶插入psiCHECK-2质粒中,构建psiCHECK-2-eGFP-mLumin 双荧光蛋白报告基因重组质粒mLumin.通过测序验证插入序列,并将此质粒转入HEK293T细胞,分别用PCR和荧光显微镜鉴定eGFP和mLumin在细胞中的表达.结果:DNA测序结果证实连接在psiCHECK-2质粒上的eGFP和mLumin基因序列与基因库中的序列一致.将psiCHECK-2-eGFP-mLumin质粒转染HEK293T细胞,能成功表达eGFP和mLumin蛋白.结论:成功构建psiCHECK-2-eGFP-mLumin双荧光蛋白报告基因质粒,且可在真核细胞中表达.
作者：潘晓园；吴卫疆；刘云；张苗苗；刘霞；杜凤移；夏圣；邵启祥
来源：江苏大学学报（医学版） 2013 年 23卷 5期
