[目的]构建稳定共表达荧光素酶(Luc)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的人源卵巢癌细胞SKOV3(SK-Luc-EGFP)并探究其在卵巢癌腹腔转移的体内外研究中的应用.[方法]利用重叠PCR扩增得到的Luc-T2A-EGFP基因片段,构建重组质粒pCDH-Luc-T2A-EGFP-Puro;采用三质粒慢病毒包装系统转染HEK 293T细胞,收集病毒液感染SKOV3细胞;通过嘌呤霉素筛选,流式细胞术检测,筛选高效表达EGFP的细胞(SK-Luc-EGFP),并通过体外生物发光实验验证Luc的表达.对SK-Luc-EGFP细胞进行如下应用的探究:利用流式细胞术和激光共聚焦区分SK-Luc-EGFP细胞与腹水微环境中的非肿瘤细胞,利用荧光显微镜观察SK-Luc-EGFP与间皮细胞的黏附,利用小动物活体成像仪观察SK-Luc-EGFP细胞的大网膜黏附以及体内成瘤的过程.[结果]成功构建慢病毒载体pCDH-Luc-T2A-EGFP-Puro;感染并筛选得到SK-Luc-EGFP单克隆细胞株.通过荧光显微镜和流式细胞术均能检测到EGFP的表达,细胞纯度达100
作者：万里舟；杜汝沛；陈康梅
来源：中山大学学报（医学科学版） 2023 年 44卷 6期
