目的 构建人生长激素释放激素变异受体1型(GHRHR-SVT1)基因绿色荧光蛋白真核表达载体1(pEGFP-N1)并在鼠成纤维细胞株NIH-3T3细胞中的表达.方法 GHRHR-SVT1基因是由人胃癌细胞株AGS中扩增出的DNA片段,克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,用高效转染试剂将pEGFP-N1/GHRHR-SVT1转染NIH-3T3细胞,NIH-3T3细胞分3组:非转染组(对照组),只加转染试剂不加质粒;转染空质粒组(pEGFP-N1组),加转染试剂与空质粒;重组质粒转染组(pEGFP-N1/GHRHR-SVT1组),加转染试剂与重组质粒.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪检测各组转染后各组NIH-3T3细胞的生长情况.结果 (1)pGEFP-N1/GHRHR-SVT1经限制性内切酶XhoⅠ和Bam H Ⅰ双酶切产生约1 080 bp和4 700 bp 2条带.(2)构建的GHRHR-SVT1 cDNA 序列与GHRHR-SVT1原始序列(AF-282259) 进行对比,第54位碱基突变(A突变为T),为无义突变.(3)重组质粒转染组NIH-3T3细胞增殖率明显高于对照组(P<0.01).(4)重组质粒转染组NIH-3T3细胞增殖指数明显高于对照组(P<0.01).结论 在适当浓度GHRH(10 μmol/L)的培养基中,GHRHR-SVT1能够促进NIH-3T3细胞增殖, 并为肿瘤的治疗提供新的思路.
作者：田力；张蕾；李伟伟；李鹏飞
来源：江西医学院学报 2009 年 49卷 3期
