目的:探讨microRNA?125a( miR?125a)对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法采用实时荧光定量PCR( qPCR)法检测人肝癌HepG2细胞及人正常肝细胞7702中的miR?125a水平,同时采用真核表达载体pGenesil?1质粒制备过表达miR?125a的重组质粒pGenesil?miR?125a及表达随机序列的阴性对照pGenesil?NC,根据实验设计将HepG2细胞分为3组:空白对照组、阴性对照组和过表达组,其中空白对照组未进行转染,阴性对照组和过表达组分别成功转染pGenesil?NC和pGenesil?miR?125a,待3组转染24、48、72及96 h后采用qPCR法检测各组的miR?125a水平,噻唑盐比色法检测各组转染24、48、72及96 h的细胞增殖率,分别采用Hoechst染色和流式细胞术检测转染24、48 h后的凋亡指数和caspase?3活化率来评价凋亡情况,流式细胞仪Annexin V?FITC/PI双染流式细胞术检测各组转染48 h后的细胞周期,同时采用免疫印迹法检测转染48 h后对凋亡相关基因( Bcl?2、Bax和Cleaved caspase?3)表达的影响。结果 HepG2细胞中miR?125a水平为(0?24±0?06),低于正常肝细胞7702细胞(P<0?05);与阴性表达组相比,过表达组转染24、48、72及96 h的miR?125a水平升高,增殖率降低,差异有统计学意义( P<0?05);与其余两组相比,过表达组
作者:金国贤;孙伟娟;程程;刘莹
来源:临床肿瘤学杂志 2015 年 1期