目的:采用RNAi技术构建CXCR4 shRNA干扰载体,探讨靶向沉默CXCR4基因表达后对人肝细胞癌增殖和侵袭作用的影响及可能机制.方法:通过蛋白质印迹法和RT-PCR,检测不同分化程度的肝癌细胞株CXCR4表达程度.通过RNAi技术,将CXCR4 shRNA干扰载体转染CXCR4高表达的肝癌细胞HepG2,并采用G418筛选出稳定表达株,蛋白质印迹法和RT-PCR验证shRNA对CXCR4基因的靶向沉默效率.以转染空载体细胞为阴性对照组,MTT法检测CXCR4基因沉默后肝癌细胞的增殖能力,Transwell小室侵袭试验检测CXCR4基因沉默后肝癌细胞的侵袭能力,蛋白质印迹法检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,免疫荧光检测MMP-2在细胞内表达.结果:CXCR4靶向沉默的细胞CXCR4表达受到显著抑制.HepG2、HepG2-Vector和HepG2-CXCR4-细胞CXCR4蛋白相对表达量分别为0.56±0.07、0.54±0.04和0.14±0.05,F=57.42,P＜0.001.正常HepG2、HepG2-Vector和HepG2-CXCR4-细胞的CXCR4mRNA相对表达量分别为1.04±0.05、1.05±0.11和0.19±0.03,P＜0.001.MTT结果显示,CXCR4基因沉默能明显抑制HepG细胞的增殖.72 h时正常HepG2、HepG2-Vector和HepG2-CXCR4-细胞的相对增殖速度分别为1.34±0.05,1.32±0.03和1.14±0.03.Transwell试验显示,10％ FBS趋化作用下,HepG2、HepG2-Vector和HepG2-CX-CR

作者：常远鸿；李汀；阴俊；郭佳；吴彦钊；樊林

来源：中华肿瘤防治杂志 2013 年 20卷 20期